分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（上、下冊(cè)）

中譯本序
譯者的話
第三版前言
上冊(cè)
第1章 質(zhì)粒及其在分子克隆中的應(yīng)用
導(dǎo)言
SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA（方案1～3）
方案1 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：小量制備
方案2 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：中量制備
方案3 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：大量制備
煮沸裂解法制備質(zhì)粒DNA（方案4和5）
方案4 煮沸裂解法小量制備質(zhì)粒DNA
方案5 煮沸裂解法大量制備質(zhì)粒DNA
方案6 牙簽法小量制備質(zhì)粒DNA
方案7 SDS裂解法提取質(zhì)粒DNA
方案8 聚乙二醇沉淀法純化質(zhì)粒DNA
方案9 層析法純化質(zhì)粒DNA
方案10 氯化銫一溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環(huán)DNA：連續(xù)梯度法
方案11 氯化銫一溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環(huán)DNA：不連續(xù)梯度法
方案12 用有機(jī)溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠
方案13 用離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠
方案14 NaCl離心法去除質(zhì)粒DNA制備物中的小片段核酸
方案15 SephacrylS-1000層析法去除質(zhì)粒DNA制備物中的小片段核酸
方案16 氯化鋰沉淀法去除質(zhì)粒：DNA制備物中的小片段核酸
方案17 在質(zhì)粒載體中進(jìn)行定向克隆
方案18 在凸出末端上連接接頭
方案19 在質(zhì)粒載體中進(jìn)行平末端片段的克隆
方案20 質(zhì)粒DNA的去磷酸化
方案21 向平末端DNA連接合成接頭
方案22 在低熔點(diǎn)瓊脂糖中連接質(zhì)粒和目的DNA
方案23 制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌的IIanahan方法：高效的轉(zhuǎn)化策略
方案24 制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌的Inoue方法：制備超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞
方案25 用氯化鈣制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌
方案26 大腸桿菌的電擊轉(zhuǎn)化
方案27 用X-gal和IPTG篩選細(xì)菌菌落：a互補(bǔ)
替代方案：X-gal和IPTG直接用于瓊脂板
方案28 小量細(xì)菌克隆的雜交法篩選
方案29 中等量細(xì)胞克隆的雜交法篩選
替代方案：菌落的快速裂解和DNA固定于尼龍膜
方案30 大量細(xì)菌克隆的雜交方法篩選
方案31 菌落的裂解和DNA與濾膜的結(jié)合
方案32 在濾膜上進(jìn)行細(xì)菌DNA的雜交
信息欄
氯霉素
卡那霉素
pBR322
四環(huán)素
氨芐青霉素和羧芐青霉素
X-gal
a互補(bǔ)
溴化乙錠
縮合劑與聚合劑
聚乙二醇沉淀法純化質(zhì)粒DNA
溶菌酶
聚乙二醇
氯化銫和氯化銫平衡密度梯度
DNA連接酶
接頭
電擊轉(zhuǎn)化
第2章 九噬菌體及其載體
導(dǎo)言
方案1 入噬菌體的鋪平板培養(yǎng)
附加方案：表達(dá)B-半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析
附加方案：大噬菌斑
方案2 入噬菌體噬菌斑的挑取
方案3 通過(guò)平板裂解和洗脫制備入噬菌體原種
替代方案：通過(guò)平板裂解和刮取制備入噬菌體原種
方案4 用小量液體培養(yǎng)物制備入噬菌體原種
方案5 入噬菌體的大規(guī)模培養(yǎng)：低倍數(shù)感染
替代方案：入噬菌體的大規(guī)模培養(yǎng)：高倍數(shù)感染
方案6 從大規(guī)模裂解物中制備入噬菌體顆粒
方案7 通過(guò)凝膠電泳測(cè)定入噬菌體原種和裂解物中DNA的含量
方案8 通過(guò)CsCl等密度梯度離心純化入噬菌體顆粒
替代方案：通過(guò)CsCl平衡梯度等密度離心純化入噬菌體顆粒
方案9 通過(guò)甘油分級(jí)梯度離心純化入噬菌體顆粒
方案10 通過(guò)沉淀／離心純化入噬菌體顆粒
方案11 用蛋白酶K和SDS從大規(guī)模培養(yǎng)物中提取入噬菌體DNA
方案12 用甲酰胺從大規(guī)模培養(yǎng)物中提取入噬菌體DNA
方案13 可被單一限制酶切割用作克隆載體的入噬菌體DNA的制備
方案14 經(jīng)雙限制酶切割用作克隆載體的入噬菌體DNA的制備
方案15 入噬菌體載體DNA的堿性磷酸酶處理
方案16 入噬菌體臂的純化：通過(guò)蔗糖密度梯度離心
方案17 用于基因組文庫(kù)中的真核DNA的部分酶切：預(yù)反應(yīng)
方案18 用于基因組文庫(kù)的真核DNA的部分酶切：制備反應(yīng)
方案19 入噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接
方案20 基因組文庫(kù)的擴(kuò)增
方案21 噬菌體DNA從噬菌斑到膜的轉(zhuǎn)移
替代方案：從噬菌斑到濾膜的快速轉(zhuǎn)移
方案22 噬菌體DNA在濾膜上的雜交
方案23 入噬菌體分離物的快速分析：從平板裂解物中純化kDNA
附加方案：通過(guò)CTAB沉淀除去多糖
方案24 入噬菌體分離物的快速分析：從液體培養(yǎng)物中純化kDNA
信息欄
噬菌體：歷史回顧
將對(duì)DNA大分子的損傷減少到最低程度
體外包裝
第3章 M13噬菌體載體
導(dǎo)言
方案1 M13噬菌體鋪平板
方案2 M13噬菌體液體培養(yǎng)
方案3 M13噬菌體雙鏈（復(fù)制型）DNA的制備
方案4 M13噬菌體單鏈DNA的制備
方案5 單鏈和雙鏈M13噬菌體DNA的大規(guī)模制備
方案6 M13噬菌體載體的克隆
方案7 重組M13噬菌體克隆分析
替代方案：雜交法篩選M13噬菌體噬菌斑
方案8 用噬菌粒載體制備單鏈DNA
信息欄
生長(zhǎng)時(shí)間
聚乙二醇
第4章 高容量載體的應(yīng)用
導(dǎo)言
方案1 應(yīng)用黏粒載體構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)
方案2 通過(guò)雜交篩選未擴(kuò)增的黏粒文庫(kù)：濾膜影印
附加方案：減少交叉雜交
方案3 黏粒文庫(kù)的擴(kuò)增和貯存：在液體培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)增
方案4 黏粒文庫(kù)的擴(kuò)增和貯存：在濾膜上擴(kuò)增
替代方案：在平板上擴(kuò)增
方案5 P1噬菌體及其克隆系統(tǒng)的應(yīng)用
附加方案：用點(diǎn)滴透析法純化高分子質(zhì)量DNA
替代方案：用Qiagen樹(shù)脂層析純化高分子質(zhì)量環(huán)狀DNA
方案6 P1噬菌體克隆在大腸桿菌宿主間的轉(zhuǎn)移
方案7 細(xì)菌人工染色體的應(yīng)用
方案8 從小量培養(yǎng)物中分離BACDNA
方案9 從大量培養(yǎng)物中分離BACDNA
方案10 酵母人工染色體的應(yīng)用
方案11 釀酒酵母的生長(zhǎng)及其DNA的制備
方案12 酵母DNA的小量制備
方案13 利用：PCR分析酵母菌落
方案14 高容量載體中基因組DNA片段末端的分離：小載體PCR
信息欄
Cre-lazP
大片段克隆產(chǎn)品及其服務(wù)
第5章 DNA凝膠電泳和脈沖場(chǎng)瓊脂糖凝膠電泳
導(dǎo)言
方案1 瓊脂糖凝膠電泳
方案2 瓊脂糖凝膠中DNA的檢測(cè)
方案3 瓊脂糖凝膠中DNA的回收：DEAE-纖維素膜電泳
方案4 瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中DNA的回收：電洗脫至透析袋
方案5 陰離子交換色譜純化從瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠回收的DNA
方案6 低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中DNA的回收：有機(jī)溶劑抽提
替代方案：用玻璃珠從瓊脂糖凝膠中回收DNA
方案7 低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中DNA的回收：用瓊脂糖酶消化
方案8 堿性瓊脂糖凝膠電泳
附加方案：堿性瓊脂糖凝膠的放射自顯影
……
第6章 真核基因組DNA的制備和分析
第7章 真核細(xì)胞mRNA的提取、純化和分析
第8章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外擴(kuò)增DNA
第9章 放射性標(biāo)記DNA探針與RNA探針的制備
第10章 合成寡核苷酸探針
第11章 cDNA文庫(kù)制備及其基因鑒定
下冊(cè)
第12章 DNA測(cè)序
第13章 誘變
第14章 表達(dá)文庫(kù)的篩選
第15章 在大腸桿菌中表達(dá)克隆化基因
第16章 哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞中導(dǎo)入克隆化基因
第17章 哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞的基因表達(dá)分析
第18章 蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)
附錄
附錄1 分子克隆中使用的緩沖液和試劑的配制
附錄2 培養(yǎng)基
附錄3 載體和細(xì)菌菌株
附錄4 分子克隆所用的酶
附錄5 酶的抑制物
附錄6 核酸
附錄7 密碼子和氨基酸
附錄8 分子克隆中的常用技術(shù)
附錄9 檢測(cè)系統(tǒng)
附錄10 DNA陣列技術(shù)
附錄11 生物信息學(xué)
附錄12 告誡
附錄13 供應(yīng)商
附錄14 商標(biāo)
索引
編輯致謝