細胞生物學實驗指導

第一部分 細胞生物學實驗方法和技術介紹
第一章 光學顯微鏡
一、明視野顯微鏡
二、暗視野顯微鏡
三、相差顯微鏡
四、微分干涉差顯微鏡
五、熒光顯微鏡
六、偏光顯微鏡
七、激光掃描共焦顯微鏡
八、多光子熒光顯微鏡
第二章 電子顯微術
一、透射電子顯微術
二、掃描電子顯微術
三、電鏡x射線微區(qū)分析技術
第三章 定量細胞術
一、顯微鏡光度術
二、流式細胞術
三、圖像處理和分析技術
第四章 顯微攝影
一、顯微攝影裝置
二、顯微攝影程序
三、彩色顯微攝影
四、熒光攝影
第五章 放射性核素示蹤技術
一、放射性核技術的核物理基礎知識
二、生物學中放射性核素示蹤技術
三、放射性樣品的測量儀器及方法
四、放射性核素示蹤實驗中的放射衛(wèi)生防護
第六章 細胞培養(yǎng)技術
一、組織培養(yǎng)的概念
二、組織培養(yǎng)簡史
三、組織培養(yǎng)的基本條件
四、培養(yǎng)方法
五、培養(yǎng)細胞的生物學
第七章 凋亡細胞的識別
一、細胞凋亡與細胞壞死在形態(tài)學和生化特征方面的區(qū)別
二、調亡細胞的分子作用機制簡介
三、觀察凋亡細胞的方法
四、研究細胞凋亡的生物學意義
第八章 綠色熒光蛋白
一、GFP的發(fā)現(xiàn)
二、GFP的性質
三、GFP的發(fā)光機制與GFP突變蛋白
四、GFP的優(yōu)點
五、GFP的應用前景
六、存在的問題
第九章 反轉錄聚合酶鏈式反應
一、逆轉錄酶
二、反轉錄引物
三、模板RNA
四、反轉錄PCR（RT-PCR）的應用
五、存在的問題
第二部分 學生實驗
實驗1 口腔上皮細胞的顯微鏡觀察
一、用熒光顯微鏡觀察口腔上皮細胞的線粒體和細胞核
二、用相差顯微鏡觀察口腔上皮細胞
三、用暗視野顯微鏡觀察牙垢中的微生物
實驗2 電鏡超薄切片
實驗3 動物細胞培養(yǎng)
一、清洗與滅菌
二、培養(yǎng)基的配制
三、Hanks、D-Hanks液和消化液（胰酶液）的配制
四、細胞傳代培養(yǎng)
五、生長曲線的測定
六、細胞凍存與復蘇
七、原代培養(yǎng)
八、新生牛血清的篩選
九、幾種常用的細胞同步化方法
實驗4 顯微攝影
實驗5 定量細胞測量的樣品制作
一、細胞DNA含量定量測量的樣品制作（Feulgen反應——用于顯微鏡光度計和圖像分析儀的透射光測量）
二、細胞DNA含量定量測量的樣品制作（PI熒光標記法——用于流式細胞儀的熒光測量）
實驗6 小鼠骨髓染色體的制備與C帶染色
一、小鼠骨髓染色體的制備
二、染色體c帶的制備
實驗7 保護性膠顯影劑和硝酸銀染核仁組織區(qū)的一步染色法
實驗8 細胞骨架觀察
一、考馬斯亮藍R250（CoomassieblueR250）染色法觀察微絲
二、甲基羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽染色法觀察微絲
三、動物細胞微管觀察
四、植物細胞微管觀察
實驗9 HeLa細胞與雞紅細胞的融合實驗
實驗10 小鼠巨噬細胞吞噬羊紅細胞實驗
實驗11 著絲點蛋白的間接免疫熒光染色法
實驗12 三尖杉酯堿誘導HL-60細胞凋亡的形態(tài)和生化特征觀察
一、三尖杉酯堿誘導HL-60細胞凋亡的形態(tài)觀察
二、三尖杉酯堿誘導HL-60細胞凋亡的生化特征觀察
實驗13 利用脂質體轉染技術對HeLa細胞中重組GFP進行觀察
實驗14 利用RT-PCR技術檢測HeLa細胞中β-actin的表達
實驗15 放射性核素示蹤技術及其應用
一、放射性核素制劑的衰變校正計算
二、幾何位置對測量的影響及外照射防護原則
三、3H-TdR摻入細胞DNA的液閃測量
四、3H-TdR摻入DNA的顯微放射自顯影觀察
五、皮質醇放射免疫分析
附錄
附錄1 顯微鏡物鏡、目鏡常用的一些符號說明
附錄2 電鏡超薄切片緩沖液、固定液和染液的配制
附錄3 動物細胞培養(yǎng)
附錄4 顯微攝影和顯微放射自顯影用溶液的配制
附錄5 常用熒光探針介紹
附錄6 用于Feulgen反應的試劑配制
附錄7 磷酸緩沖鹽（Phosphate-bufferedSaline，PBS，pH7．4）溶液的配制和各種pH值Tris-HCI緩沖液的配制
附錄8 用于染色體和C帶制備的溶液配制
附錄9 用于細胞骨架觀察的溶液配制
附錄10 用于動物細胞融合和吞噬實驗的試劑配制
附錄11 防熒光褪色固片介質、細胞粘貼和封片劑
附錄12 對HeLa細胞中重組GFP進行觀察的試劑配制
附錄13 利用RT-PCR技術對HeLa細胞中β-actin的表達進行檢測的試劑配制
附錄14 放射性核素示蹤技術常用數據