植物基因工程實驗手冊

第1章　目的基因的分離
　1.1　植物組織DNA的提取
　　1.1.1　植物組織總DNA的提取
　　1.1.2　植物細(xì)胞核DNA的提取
　　1.1.3　植物細(xì)胞葉綠體DNA的提取
　　1.1.4　植物細(xì)胞線粒體DNA的提取
　1.2　植物組織RNA的提取
　　1.2.1　植物組織總RNA的提取
　　1.2.2　mRNA的分離純化
　1.3　目的基因的PCR擴(kuò)增
　　1.3.1　mRNA差別顯示技術(shù)
　　1.3.2　抑制性扣除雜交技術(shù)
　　1.3.3　保守序列PCR克隆技術(shù)
　參考文獻(xiàn)
第2章　載體構(gòu)建
　2.1　擴(kuò)增體系建立　
　　2.1.1　大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取
　　2.1.2　DNA的限制性內(nèi)切酶消化
　　2.1.3　DNA片段的純化回收
　　2.1.4　目的基因與載體的連接
　　2.1.5　重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌
　　2.1.6　重組質(zhì)粒細(xì)胞落的鑒定
　2.2　植物遺傳轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
　　2.2.1　根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒DNA的提取
　　2.2.2　Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建
　　2.2.3　發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒DNA的提取
　2.3　組織特異性表達(dá)載體的構(gòu)建
　　2.3.1　組織特異性啟動子與質(zhì)粒DNA的酶切及回收
　　2.3.2　組織特異性啟動子與載體DNA片段的連接
　參考文獻(xiàn)
第3章　目的基因的轉(zhuǎn)化
　3.1　農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
　　3.1.1　煙草農(nóng)桿菌葉盤轉(zhuǎn)化
　　3.1.2　擬南芥花序浸潤轉(zhuǎn)化
　　3.1.3　水稻愈傷組織農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化　
　　3.1.4　發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
　3.2　基因槍轉(zhuǎn)化法
　　3.2.1　小麥幼胚基因槍轉(zhuǎn)化
　　3.2.2　葉綠體遺傳轉(zhuǎn)化
　3.3　電穿孔法
　3.4　PEG介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化法
　參考文獻(xiàn)
第4章　轉(zhuǎn)基因植物的鑒定
　4.1　標(biāo)記基因的檢測
　　4.1.1　gus基因檢測
　　4.1.2　bar基因的檢測
　　4.1.3　GFP的檢測
　4.2　目的基因的整合鑒定
　　4.2.1　Southern印跡雜交
　　4.2.2　RT-PCR
　　4.2.3　Northern雜交
　　4.2.4　熒光原位雜交（FISH）
　4.3　基因的表達(dá)分析
　　4.3.1　SDS-PAGE分析
　　4.3.2　Western印跡
　參考文獻(xiàn)
第5章　轉(zhuǎn)基因植物的基因安全評價
　5.1　轉(zhuǎn)基因小麥環(huán)境釋放中花粉介導(dǎo)的基因漂移檢測
　5.2　土壤微生物群落的檢測
　5.3　轉(zhuǎn)基因食品的毒理學(xué)評價
　參考文獻(xiàn)
第6章　計算機(jī)在植物基因工程研究中的應(yīng)用
　6.1　生物相關(guān)軟件
　6.2　生物學(xué)實用網(wǎng)站
　參考文獻(xiàn)
附錄
　附錄1　主要溶液（母液）及緩沖液的配制
　附錄2　常用培養(yǎng)基的配制
　附錄3　常用抗生素的配制及使用濃度
　附錄4　凝膠濃度的有效分離范圍
　附錄5　常用的相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
　附錄6　核酸的量與質(zhì)量間的換算