植物基因工程實驗手冊

第1章　目的基因的分離
　1.1　植物組織DNA的提取
　　1.1.1　植物組織總DNA的提取
　　1.1.2　植物細胞核DNA的提取
　　1.1.3　植物細胞葉綠體DNA的提取
　　1.1.4　植物細胞線粒體DNA的提取
　1.2　植物組織RNA的提取
　　1.2.1　植物組織總RNA的提取
　　1.2.2　mRNA的分離純化
　1.3　目的基因的PCR擴增
　　1.3.1　mRNA差別顯示技術
　　1.3.2　抑制性扣除雜交技術
　　1.3.3　保守序列PCR克隆技術
　參考文獻
第2章　載體構建
　2.1　擴增體系建立　
　　2.1.1　大腸桿菌質粒DNA的提取
　　2.1.2　DNA的限制性內切酶消化
　　2.1.3　DNA片段的純化回收
　　2.1.4　目的基因與載體的連接
　　2.1.5　重組質粒DNA轉化大腸桿菌
　　2.1.6　重組質粒細胞落的鑒定
　2.2　植物遺傳轉化載體構建
　　2.2.1　根癌農(nóng)桿菌Ti質粒DNA的提取
　　2.2.2　Ti質粒轉化載體的構建
　　2.2.3　發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質粒DNA的提取
　2.3　組織特異性表達載體的構建
　　2.3.1　組織特異性啟動子與質粒DNA的酶切及回收
　　2.3.2　組織特異性啟動子與載體DNA片段的連接
　參考文獻
第3章　目的基因的轉化
　3.1　農(nóng)桿菌轉化法
　　3.1.1　煙草農(nóng)桿菌葉盤轉化
　　3.1.2　擬南芥花序浸潤轉化
　　3.1.3　水稻愈傷組織農(nóng)桿菌轉化　
　　3.1.4　發(fā)根農(nóng)桿菌轉化
　3.2　基因槍轉化法
　　3.2.1　小麥幼胚基因槍轉化
　　3.2.2　葉綠體遺傳轉化
　3.3　電穿孔法
　3.4　PEG介導的基因轉化法
　參考文獻
第4章　轉基因植物的鑒定
　4.1　標記基因的檢測
　　4.1.1　gus基因檢測
　　4.1.2　bar基因的檢測
　　4.1.3　GFP的檢測
　4.2　目的基因的整合鑒定
　　4.2.1　Southern印跡雜交
　　4.2.2　RT-PCR
　　4.2.3　Northern雜交
　　4.2.4　熒光原位雜交（FISH）
　4.3　基因的表達分析
　　4.3.1　SDS-PAGE分析
　　4.3.2　Western印跡
　參考文獻
第5章　轉基因植物的基因安全評價
　5.1　轉基因小麥環(huán)境釋放中花粉介導的基因漂移檢測
　5.2　土壤微生物群落的檢測
　5.3　轉基因食品的毒理學評價
　參考文獻
第6章　計算機在植物基因工程研究中的應用
　6.1　生物相關軟件
　6.2　生物學實用網(wǎng)站
　參考文獻
附錄
　附錄1　主要溶液（母液）及緩沖液的配制
　附錄2　常用培養(yǎng)基的配制
　附錄3　常用抗生素的配制及使用濃度
　附錄4　凝膠濃度的有效分離范圍
　附錄5　常用的相對分子質量標準
　附錄6　核酸的量與質量間的換算