化學標記與探針技術在分子生物學中的應用

第1章緒論1
1.1探針與標記1
1.2探針的分類及其檢測技術2
1.3芯片技術3
1.4基于探針技術的單細胞和單分子檢測3
參考文獻5

第2章蛋白質與核酸的熒光標記6
2.1基本原理6
2.1.1熒光的產(chǎn)生6
2.1.2熒光探針的一些重要參數(shù)7
2.1.3分子結構與熒光的關系8
2.1.4細胞內常見的內源性熒光分子9
2.1.5熒光探針9
2.2蛋白質的熒光標記10
2.2.1通過化學反應進行標記10
2.2.2蛋白質的特異性標記方法16
2.2.3抗體的標記25
2.3核酸的熒光標記25
2.3.1寡核苷酸的標記26
2.3.2核酸的標記32
2.3.3通過生物素親合素系統(tǒng)進行特異性標記33
2.3.4核酸熒光探針的應用33
參考文獻38

第3章小分子熒光探針39
3.1用于檢測陽離子的小分子熒光探針39
3.1.1金屬離子熒光探針的基本結構39
3.1.2檢測鉀離子和鈉離子的熒光探針41
3.1.3檢測鈣離子的熒光探針43
3.1.4檢測鎂離子的熒光探針45
3.1.5檢測鋅離子的熒光探針49
3.2用于檢測pH的小分子熒光探針53
3.3用于檢測陰離子的小分子熒光探針55
3.4用于檢測自由基的小分子熒光探針58
3.4.1檢測活性氧的熒光探針59
3.4.2檢測活性氮的熒光探針65
3.5用于測定酶活性的小分子熒光探針68
參考文獻68

第4章綠色熒光蛋白及其類似物71
4.1綠色熒光蛋白的化學結構71
4.1.1一級結構及發(fā)光原理71
4.1.2三維結構72
4.2綠色熒光蛋白的性質73
4.2.1GFP的光譜特性73
4.2.2GFP和它的突變體73
4.2.3雙光子激發(fā)75
4.2.4GFP的穩(wěn)定性75
4.2.5GFP的改進75
4.3綠色熒光蛋白在分子生物學中的應用76
4.3.1作為報告基因的應用76
4.3.2作為融合標簽的應用77
4.3.3作為生物傳感器的應用78
4.4綠色熒光蛋白類似物87
4.4.1來自珊瑚蟲的熒光蛋白DsRed87
4.4.2來自海洋中三色紫羅蘭的熒光蛋白89
4.4.3來自地中海?？械臒晒獾鞍?9
參考文獻90

第5章量子點熒光探針94
5.1量子點熒光探針的化學性質94
5.2量子點熒光探針的光學性質97
5.3量子點熒光探針在生物學中的應用99
5.3.1量子點熒光探針用于細胞成像100
5.3.2量子點熒光探針用于體內成像101
5.3.3量子點熒光探針用于熒光免疫分析103
5.3.4量子點熒光探針在FRET研究中的應用104
5.4量子點熒光探針的毒性106
參考文獻106

第6章同位素標記109
6.1放射性同位素的一些基本概念和檢測技術109
6.1.1放射性活度及其度量單位109
6.1.2放射性同位素的半衰期109
6.1.3放射性的測量111
6.2放射性同位素標記的氨基酸探針和蛋白質探針111
6.2.1氨基酸的放射性同位素標記112
6.2.2蛋白質和多肽的放射性同位素標記112
6.2.3用標記轉移技術研究蛋白質蛋白質相互作用112
6.3放射性同位素標記的核酸探針114
6.3.1放射性同位素標記的DNA探針和RNA探針114
6.3.2放射性同位素標記的寡核苷酸探針115
6.4放射性同位素標記的小分子探針115
6.4.1放射性同位素標記的底物在酶結構研究中的應用115
6.4.2放射性同位素標記的底物在酶活性檢測中的應用116
6.4.3放射性同位素標記的小分子探針在生物學和醫(yī)學領域中的應用117
6.4.4放射性同位素標記的配體和藥物在正電子發(fā)射斷層顯像技術中的
應用118
6.5穩(wěn)定性同位素標記技術在蛋白質組學定量分析中的應用120
6.5.1代謝標記方法120
6.5.2提取后標記方法121
6.5.3反轉標記方法122
參考文獻123

第7章自旋標記125
7.1基本原理125
7.2蛋白質和肽的自旋標記126
7.2.1標記方法126
7.2.2自旋標記法用于研究蛋白質的結構及動力學126
7.2.3自旋標記法用于研究蛋白質核酸的相互作用131
7.2.4自旋標記法用于研究蛋白質蛋白質的相互作用134
7.3糖和糖苷的自旋標記135
7.4脂質的自旋標記135
7.4.1脂質的自旋標記方法135
7.4.2自旋標記的脂質在生物膜結構研究中的應用136
7.4.3自旋標記的脂質在脂質蛋白質、蛋白質蛋白質相互作用研究中的
應用136
參考文獻139