桃CBF和ICE轉錄因子基因克隆與功能分析

第一章 文獻綜述
第一節(jié) 植物抗逆性及研究意義
一、逆境與植物抗逆性
二、研究植物抗逆性的意義
第二節(jié) 低溫脅迫對植物的影響及研究意義
一、低溫脅迫
二、低溫脅迫對植物生長發(fā)育的影響
第三節(jié) 植物的抗寒機理及研究進展
一、冷馴化（cold acclimation）
二、膜結構的穩(wěn)定與抗寒性
三、滲透調節(jié)物質
四、植物的抗氧化保護系統(tǒng)
五、細胞酶系
六、冷誘導基因（COR）
第四節(jié) 植物抗寒基因與抗寒性改良的研究
一、編碼功能性蛋白的基因
二、編碼調控性蛋白的基因
三、CBF和ICE轉錄因子基因對植物抗寒性的改良
第五節(jié) 桃的冷害和抗冷性研究
一、桃概述
二、低溫對桃樹生長發(fā)育的影響
第六節(jié) 本研究的目的和意義
第二章 桃CBF和ICE轉錄因子基因的克隆和序列分析
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 試驗材料、試劑和儀器
一、試驗材料
二、試驗所需的菌株、載體和感受態(tài)細胞
三、主要化學試劑
四、主要儀器設備
第三節(jié) 試驗方法
一、桃基因組DNA和總RNA的提取與檢測
二、PCR擴增及其產(chǎn)物的檢測
三、目的片段的回收與檢測
四、克隆片段的連接和轉化及測序
五、CBF基因的酵母單雜交
第四節(jié) 結果與分析
一、桃基因組DNA和總RNA的檢測結果
二、桃CBF基因和ICE基因的克隆
三、桃樹CBF基因的生物信息學分析
四、桃ICE基因的信息學分析
五、酵母單雜交
第五節(jié) 小結與討論
一、桃的核酸提取
二、CBF和ICE基因的克隆
三、CBF基因的序列分析
四、ICE基因的序列分析
五、酵母單雜交
第三章 桃CBF和ICE基因的煙草轉化
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 試驗材料與儀器
一、試驗材料
二、主要化學試劑
三、主要儀器設備
第三節(jié) 試驗方法
一、P3301.PpCBF和UN.ICE表達載體構建
二、農(nóng)桿菌工程菌的獲得與鑒定
三、表達載體對煙草的轉化
第四節(jié) 結果與分析
一、表達載體的構建
二、過表達轉桃CBF基因、ICE基因煙草的創(chuàng)制
第五節(jié) 小結
一、外源基因轉入不同物種所需載體不同，不同基因轉入同一物種也存在過表達載體的選擇問題
二、轉基因過程中的污染問題
第四章 轉桃CBF基因煙草耐逆性分析
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 試驗材料和儀器
一、試驗材料
二、主要化學試劑
三、主要儀器設備
第三節(jié) 試驗方法
一、轉CBF基因煙草的分子鑒定
二、轉CBF基因煙草苗期抗逆性研究
三、轉CBF基因煙草苗期與抗性相關的生理生化指標的檢測
第四節(jié) 結果與分析
一、過表達CBF轉基因煙草的分子鑒定結果
二、轉CBF基因煙草陽性植株的逆境脅迫結果
第五節(jié) 小結與討論
一、轉CBF基因煙草的分子鑒定
二、轉桃CBF基因與非轉基因煙草植株在逆境脅迫下的表型變化
三、轉桃CBF基因比非轉基因煙草植株矮小
四、轉桃CBF基因與對照株在逆境脅迫下的丙二醛和電導度變化
五、轉桃CBF基因與非轉基因煙草植株在逆境脅迫下的SOD酶和POD酶活性變化
六、轉桃CBF基因與非轉基因煙草植株在逆境脅迫下的可溶性糖和脯氨酸含量的變化
第五章 轉CBF基因煙草的FAD和ERDB兩基因的表達分析
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 試驗材料和儀器
一、試驗材料
二、主要化學試劑和儀器
第三節(jié) 試驗方法
一、不同處理下煙草葉片的總RNA提取
二、RNA的質量檢測與RT-PCR
三、FAD和ERDB兩基因在逆境下的應答表達分析
第四節(jié) 結果與分析
一、低溫脅迫下轉CBF基因煙草與非轉基因煙草的FAD和ERDB基因的表達
二、干旱脅迫下轉CBF基因煙草與非轉基因煙草的FAD和ERDB基因的表達
三、鹽脅迫下轉CBF基因煙草與非轉基因煙草的FAD和ERDB基因的表達
第五節(jié) 小結與討論
第六章 研究結果與展望
參考文獻
附錄
附錄一 本實驗所需培養(yǎng)基的配方
附錄二 試驗中所用的引物及序列
附錄三 pCMBLA3301.CBF表達載體的構建圖譜
附錄四 UN.ICE表達載體的構建圖譜
附錄五 轉基因煙草轉化過程
附錄六 冷脅迫下轉CBF基因植株與非轉基因植株的表型變化
附錄七 干旱脅迫下轉CBF基因植株與非轉基因植株的表型變化
縮略詞表